重要提示
采用EnvirusTM-AdV增強后,感染時的細胞融合度對感染效果有影響,建議細胞融合度在30-50%左右時進行感染實驗。確定了細胞量以后,建議采用倍比稀釋的方法,用不同量的腺病毒(MOI值:1-1000pfu/cell)進行實驗以確定的腺病毒用量。EnvirusTM-AdV和病毒的稀釋液采用和細胞基礎培養基一致的無血清液體,如無血清DMEM或1640。
實驗過程(以24孔板感染為例)
提前一天將細胞種植在24孔板中,以感染時細胞融合度在30-50%左右為宜(懸浮細胞根據需要調整,不要采用過高的細胞密度)。將4ul的EnvirusTM-AdV用25μl無血清稀釋液稀釋,充分混勻,制成EnvirusTM-AdV稀釋液。4℃靜置5分鐘。將適量病毒原液或稀釋液與EnvirusTM-AdV稀釋液輕柔混勻,4℃靜置15分鐘。
注:如采用病毒原液直接混合出現沉淀,建議用與⑴等量同樣的無血清稀釋液稀釋病毒。
將上述混合液加入到含*培養基的細胞上,37℃培養8小時后觀察細胞狀態,如沒有明顯變化,不要更換培養基,繼續培養。由于腺病毒感染較快,可分別在12,24,48小時觀察表達情況。
注:適當減少感染時的細胞培養基量可以增加感染效率,但也可能增加細胞毒性。如出現細胞毒性可增加培養基量或更換培養基。