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ELISA試劑盒的比色測定抗體含量
更新時間:2016-07-20   點擊次數:2093次

    目前常用的幾種ELISA試劑盒方法有:測定抗體的間接法,測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗采用間接法測定單克隆抗體效價。其主要過程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應板的凹孔內,加待測抗體,保溫后洗滌以除去未結合的雜蛋白質,加酶標抗抗體,保溫后洗滌,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿終止酶促反應,用目測或光電。

三、操作步驟

①抗原包被:兔抗人IgG ELISA試劑盒作為抗原,用包被液l:8000稀釋,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應板中。4℃放置過夜。

②洗滌:次日傾去凹孔內的液體,洗滌液洗3次。

③封閉:加l00μL/孔封閉液,室溫放置0.5h.

④洗滌:用洗滌液洗3次。

⑤加待測樣品(一抗):將含單克降抗體的細胞培養上清在另-塊板上用PBS 連續稀釋(按照1:2或1:10),100μL /孔加到 已包被的板上,每個樣品平行做兩份,PBS 或空白培養基作為陰性對照,已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。

⑥洗滌:用洗滌液洗3次。

⑦加酶標抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP,用封閉液l :8000稀釋,100μL/孔,加蓋37℃恒溫箱溫育1h。

⑧洗滌:用洗滌液洗5次,蒸餾水洗2次。

⑨顯色:加新鮮配制的底物溶液100μL/孔,室溫暗處放置5~30min,顯示藍色。

⑩終止反應、比色:加50μL/孔終止液。ELISA試劑盒顏色變黃;用酶標儀測定450nm 處各孔的吸光值,陽性反應的zui大稀釋度為待測 樣品的效價。

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